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        分子生物學之PCR
        • 來自:星辰生物
        • 發布時間:2020/7/10
        • 作者:Devon

         一、實驗原理

                PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。

        二、實驗步驟

                整個實驗分為PCR引物設計-PCR模板制備-PCR循環-PCR檢測四大步驟;

                 其中PCR循環分為三步:

                 DNA變性:(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA

                 退火:(60℃-65℃):系統溫度降低,引物與DNA模板結合,形成局部雙鏈。

                 延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP為原料,從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸,合成與模板互補的DNA鏈。


        三、實驗結果

               例:

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