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      2. 細胞培養學之貼壁細胞傳代
        • 來自:星辰生物
        • 發布時間:2020/4/19
        • 作者:Devon

        一、實驗原理

            貼壁細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,細胞停止增殖;為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,須進行傳代再培養。

        二、實驗步驟

            1. 超凈臺紫外消毒30 min。水浴鍋調至37.5℃,將培養液和PBS放入水浴鍋。

            2. 將培養液和PBS取出,消毒后放入超凈臺中;胰酶從冰箱取出,消毒后放入超凈臺。

            3. 從細胞培養箱中取出細胞放入超凈臺,倒掉培養液,沿側壁加入PBS清洗2次。

            4. 沿側壁加入適量的胰酶,將細胞放入培養箱,計時2min后放回超凈臺。加入等量的培養液終止消化,用移液槍輕輕吹打吸取消化的細胞,收集到離心管中離心。

            5. 倒掉上清液,用PBS清洗兩次后加入培養液吹散細胞,將細胞懸液按需求傳代到培養皿中。

            6. 顯微鏡下觀察細胞狀態,然后放入細胞培養箱(5% CO2,37℃)。

            7. 一般貼壁細胞生長到90%以上時進行傳代。